2物理化學(xué)鑒定

通過物理化學(xué)方法是通過種子在某些特殊的化學(xué)藥劑中產(chǎn)生特定的反應(yīng)，測定種子的生理生化指標(biāo)以鑒定品種純度。如熒光掃描分析法、苯酚染色法、愈創(chuàng)木酚法等。物理鑒定法，可根據(jù)不同品種種子和幼苗含有熒光物質(zhì)的差異進行鑒定。如利用紫外光處理燕麥種子可產(chǎn)生熒光，根據(jù)熒光的有無或強弱可區(qū)分不同品種。化學(xué)鑒定法可根據(jù)不同品種皮殼的成分和化學(xué)物質(zhì)的差異，以及對不同化學(xué)試劑反應(yīng)顯色的差異來鑒定品種。該方法快速、簡便，但因要求被鑒定的種子必須具有物理化學(xué)的特異反應(yīng)，其應(yīng)用范圍也受到很大的限制，目前應(yīng)用較少。

3蛋白質(zhì)電泳鑒定技術(shù)

不同作物品種基因型不同，基因的直接表達產(chǎn)物——蛋白質(zhì)在種類、數(shù)量、結(jié)構(gòu)等方面亦不同。電泳法是根據(jù)蛋白質(zhì)數(shù)量、大小和結(jié)構(gòu)的差異來揭示基因的差異，即由生化表現(xiàn)型反映基因型的生化標(biāo)記方法，具有快速、準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好的優(yōu)點。利用電泳技術(shù)對備檢品種的種子或幼苗的蛋白質(zhì)進行分離、染色，根據(jù)蛋白質(zhì)電泳譜帶的差異，并與品種的標(biāo)準(zhǔn)譜帶相比較，從而鑒定品種的真實性和種子純度。電泳鑒定方法中以同工酶電泳法和種子蛋白電泳法在品種鑒定和種子純度分析研究方面己得到廣泛應(yīng)用。

3．1 同工酶電泳法

同工酶是指來源相同，催化相同反應(yīng)而結(jié)構(gòu)不同的酶分子類型。同工酶譜差異主要是由決定酶蛋白本身的等位基因和非等位基因的差異造成的，同工酶譜是基因表達后的分子水平的表型，通過其譜帶的分析能快速簡便地識別出編碼這些譜帶的基因位點和等位基因。同工酶電泳法是從植物組織的蛋白粗提物中通過電泳技術(shù)和組織化學(xué)染色法來分離各種酶的同工酶，將酶的多種形式轉(zhuǎn)變成肉眼可辨的酶譜帶型。通過比較同工酶譜，來確定作物種子的純度。目前，同工酶電泳法已被廣泛用于建立遺傳圖譜、種群分析等相關(guān)研究中。與形態(tài)鑒定法相比，同工酶電泳法具備兩個方面的優(yōu)點：一是表現(xiàn)中性，對植物經(jīng)濟性狀一般沒有大的不良影響；二是直接反映了基因產(chǎn)物差異，受環(huán)境影響較小。目前，在作物種子純度鑒定中，最常用的、多態(tài)性較強的是酯酶同工酶、過氧化物同工酶、磷酸酶同工酶等，所用電泳方法多為聚丙烯酰胺凝膠電泳法。

3．2種子蛋白電泳法