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高通量組織研磨儀制樣分析藻類葉綠素

來源： http://www.petseason.cn/ 　類別：技術(shù)文章　更新時(shí)間：2015-09-18　閱讀次

　　藻類的特異性色素是葉綠素、葉黃素和胡蘿卜素.浮游藻類里常見的三種葉綠素是葉綠素a,b和c.葉綠素a在一切浮游藻類里大約占有機(jī)物干重的1~2%,是估計(jì)藻類生物量的好指標(biāo).細(xì)胞的葉綠素含量隨種類或類群而有所不同,同時(shí)還受年齡、生長(zhǎng)率、光和營(yíng)養(yǎng)條件的影響.脫鎂葉綠素a(一種葉綠素a的普通降解產(chǎn)物)能夠干擾葉綠素a的測(cè)定,因?yàn)槿绻嬖诿撴V葉綠素a,它能在葉綠素a的相同光譜區(qū)吸收光和熒光,造成葉綠素a值的誤差.當(dāng)測(cè)定葉綠素a的時(shí)候還要測(cè)定脫鎂葉綠素a.葉綠素a和脫鎂葉綠素a之比可作為浮游植物生理?xiàng)l件的一個(gè)良好指標(biāo)。高通量組織研磨儀在研究工作中起到制樣的作用，為研究提供有效的幫助。
　　
　　檢測(cè)限隨熒光計(jì)結(jié)構(gòu)與流速而變,但對(duì)于大多數(shù)葉綠素與它們的降解產(chǎn)物來說,每次進(jìn)樣檢測(cè)限范圍在10~100pg.HPLC法的精確度主要取決于色素標(biāo)準(zhǔn)樣的純度.更理想的方法是測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)樣的吸收光譜(350~750nm)并與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)相比較.色素的純度也可用HPLC法來測(cè)定,條件是不存在能與標(biāo)準(zhǔn)物的吸收和熒光譜帶相重疊的共洗脫污染物.如果分光光度法測(cè)得的數(shù)據(jù)經(jīng)脫鎂色素校正,HPLC的結(jié)果表達(dá)為色素當(dāng)量(例如:葉綠素a當(dāng)量=脫植基葉綠素a+葉綠素a+葉綠素ac,假定使用正確的分子量校正值),那么HPLC法與分光光度法提供的色素濃度與提供的EPA標(biāo)準(zhǔn)符合得很好.因此如果明顯的存在色素衍生物,用分光光度法測(cè)得的數(shù)據(jù)會(huì)偏高.要HPLC法與熒光法測(cè)得的數(shù)據(jù)一致則取決于附加的葉綠素b,c和它們的衍生物.
　　
　　通過先前高通量組織研磨儀制備的標(biāo)準(zhǔn)物校準(zhǔn)HPLC系統(tǒng)的工作標(biāo)準(zhǔn).混合1ml標(biāo)準(zhǔn)物與300LL蒸餾水,搖動(dòng),平衡5分鐘后進(jìn)樣.用300LL標(biāo)準(zhǔn)液漂洗注射器2次,注射器中吸入500LL標(biāo)準(zhǔn)液用于進(jìn)樣,將注射器插入進(jìn)樣閥,充滿200LL的進(jìn)樣環(huán)管.混合1ml90%丙酮與300LL蒸餾水作為空白液.建立標(biāo)準(zhǔn)色素濃度與熒光峰面積(或高)的標(biāo)準(zhǔn)曲線.這種方法為葉綠素與類胡蘿卜素的分離而設(shè)計(jì),同時(shí)也可以分離主要的葉綠素分解產(chǎn)物.方法的精確度由測(cè)定三倍進(jìn)樣的浮游植物群落和植物的提取物確定.使用合適的內(nèi)標(biāo)物可提高精確度.

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